• 企业新闻

  • 行业动态

  • 被内毒素虐哭的我们该怎么办?

    2021.11.30

    什么是质粒?

    质粒(plasmid)是独立于染色体外的双链闭合环状DNA分子,大小范围为0.8 ~ 120kb,具有自主复制和转录能力,常以超螺旋状态存在,广泛存在于细菌、放线菌和真菌中。

    在过去的几十年中,质粒作为广泛用于各种微生物和动物细胞中DNA操作和基因表达的分子工具,发挥了至关重要的作用。质粒在生物技术中具有许多应用,并且通常用作细菌中的克隆载体,并用于大规模蛋白质生产、基因疗法、mRNA疗法、疫苗开发、基因工程和动物疾病模型的创建。

    那什么是内毒素?

    内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的特有成分,主要是脂多糖中的类脂A,在细菌被裂解时被释放出来,由于其化学结构和特性,在质粒的纯化过程中很容易混入质粒DNA一同提取出来。内毒素的存在会造成细胞死亡,严重的影响质粒转染细胞的效率。

     由于试验目的不同,质粒DNA的质量也有不同的要求,尤其是在细胞转染的过程中,质粒中的内毒素水平会明显影响细胞的转染效率,所以对质粒的质量要求更为苛刻。一个非常重要的要求是高纯度的无内毒素质粒DNA,可以使用鲎试剂(LAL)或其他检测方法进行内毒素和热原测试来确定。

    而面对市售的种类繁多的内毒素清除方法,正确的选择是试验成功的关键,来一起看下我们常遇到的两个问题:

    一、过滤器去除内毒素后有残留

    过滤柱去除看似方便,无需孵育等待,却更考验过滤柱的材质和最大吸附量,如产生大量沉淀倒入过滤器会阻塞过滤,影响过滤效果,甚至导致质粒产量降低。

    二、内毒素残留干扰浓度测定,导致浓度虚高

    提取出来的质粒通常会用NanoDrop测定质粒浓度,有时测出来1000ng/ul甚至更高,转染却不成功,浪费时间更浪费了宝贵的样本,这都是内毒素在作祟,导致测出来的浓度值虚高。

    跟随星博士一起看实例→样本:pCMV-SPORT6质粒。OD600:1.26
    浓度测定结果

    1.1.png
    1.0.png

    结合浓度测定结果和图1电泳结果来看,样本 1-3浓度虽高,却残留明显。

    图2为内毒素去除效果比较:左侧为某品牌质粒中内毒素大于0.8EU/μg,右侧为思科捷AD0103提取后质粒中内毒素低于0.1EU/μg。

    怎么解决?
    A: 为您推荐思科捷无内毒素质粒提取试剂盒!
    1.4.png

    本试剂盒适用于无内毒素高纯度质粒 DNA 的小量或中量制备与纯化,获得内毒素水平低于 0.1 EU /μg 的质粒,所得质粒可直接用于酶切、转化PCR、测序、细胞转染等分子生物学实验。

    产品特点:

    1. 快捷高效:无需手动过滤操作,无需柱平衡,操作步骤简单,实验更加便捷 。

    2. 浓度纯度高:产量提高,满足多种下游实验。

    3. 内毒素去除彻底:孵育去除内毒素,残留低,测定更加准确。


  • 在线客服
  • 在线留言
  • 联系电话
    400-6947-688
  • 招商热线
    185 6251 5130
  • Copyright © 2019 山东思科捷生物技术有限公司 All right reserved 浩赛官网 科学仪器 网站建设 东八区创意